临床检验仪器学笔记 01 第一章 绪论
学习目标
掌握 临床检验常用仪器的主要实验技术。
熟悉 临床检验常用仪器的名称及其功能;临床检验常用仪器的发展趋势。
了解 临床检验常用仪器的使用与管理。
一、概念
(一)吸收光谱
吸收光谱是指基于物质的分子或原子对辐射能的选择性吸收而得到的分子或原子光谱。
(二)发射光谱
是指物质的分子、原子或离子接受外界能量,由基态跃至高能态,再由高能态回到基态而产生的光谱。
(三)高效液相色谱
是在经典色谱法的基础上把流动相改为用高压输送,用小粒径的填料充填色谱柱,提高柱效应,并且连接高灵敏度的检测器,能对流出物进行连续检测。
(四)质谱
是带电原子、分子或分子碎片按质量-电荷比的大小顺序排列的图谱。
(五)电泳
是指分散介质中带电粒子在电场作用下,带负电荷的粒子向电场的正极移动,带正电荷的粒子向电场的负极移动的现象。
二、临床检验常用仪器的主要实验技术
(一)光谱分析技术
光谱分析技术是指借助光与物质之间发生相互作用时所产生的吸收、发射或散射光谱的波长或强度对物质进行定性、定量分析的技术。
(二)电化学分析技术
电化学分析技术是指将待测物质溶液组成一个化学池,通过测量电池的电位、电流、电量和电阻等变量,使待测物质的浓度转变为电学参数而进行检测的分析技术。
(三)色谱法
色谱法是一类分离分析技术的总称,主要用于复杂的多组分混合物的分离和分析。色谱法利用混合物中各组分在互不相溶的两相之间分配系数的差异而使物质的各组分得到分离,再对其进行定性或定量测定。
(四)电泳分析技术
利用电泳现象进行物质分离的技术称为电泳分析技术。
(五)流式细胞术
流式细胞术是综合了激光、流体力学、计算机及电子测量等技术能在流动相快速准确测量细胞的细胞分析技术。
(六)标记免疫技术
标记免疫技术是各种临床免疫学测定技术中的基本技术,是指用不同的物质标记抗原或抗体,使其具有示踪功能,通过抗原-抗体的特异性反应,达到能检测出临床标本中待测物质的目的。
(七)荧光免疫技术
荧光免疫技术是将抗原-抗体反应与荧光标记技术相结合,从而提高了反应的特异性、敏感性和直观性
(八)放射免疫技术
放射免疫技术是以放射性核素为示踪物标记抗原(或抗体)测定样本中抗体(或抗原)的一种标记疫技术
(九)酶免疫技术
酶免疫技术用酶作为标记物,是一种把醇催化底物的高效性(微量的酶分十可催化大量底物)和抗原-抗体反应的高特异性相结合的标记免疫技术
(十)化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术是新近发展起来的标记免疫技术,是将发光原理和免疫反应相结合的一种测定微量抗原或抗体的技术。
三、临床检验的常用仪器
(一)血细胞分析仪
又称血液自动分析仪,它能对血液中的细胞成分(红细胞、白细胞、血小板、网织红细胞等)进行计数和白细胞分类计数,能测定血液中的血红蛋白等。
(二)血液凝固分析仪
血液凝固分析仪是对血栓与止血有关成分进行自动化检测的常规检验仪器。
(三)尿液分析仪
尿液分析仪采用干化学技术,分析尿液理化性质的变化。
(四)尿液有形成分分析仪
尿液有形成分分析仪能定量识别尿液中的各种有形成分。
(五)自动化生化分析仪
自动化生化分析仪能够分析和测定蛋白质、糖类、无机离子、血清酶、血气与酸碱分析、脂蛋及载脂蛋白等物质。
(六)自动化免疫分析仪
通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。
(七)自动化血培养检测和分析系统
与人工细菌培养方法相比,自动化血培养系统具有更多的优势。
(八)自动化微生物鉴定和药敏分析系统
自动化微生物鉴定和药敏分析系统能鉴定出包括需氧菌、厌氧菌、真菌的数百种细菌种类,能进行细菌药物敏感试验和最低抑菌浓度测定等,在数小时内即可得出鉴定结果。
(九)PCR 扩增仪
利用聚合酶链反应扩增特定的 DNA 片段的分子生物学仪器。
(十)荧光定量 PCR 扩增仪
由荧光定量系统和计算机组成、用来监测 PCR 循环过程中的荧光信号,通过标准曲线的计算,对 DNA 模板初始浓度进行定量的分子生物学仪器。
(十一)DNA 测序仪
分析 DNA 碱基序列的分子生物学仪器。
四、临床检验常用仪器的发展趋势
1、自动化
2、一体化
一体化即不同检测系统间的整合通过更新技术平台把不同的测定模块整合在一起,形成一个检测平台,以满足实验室降低成本提高效率、节约实验室空间和缩短检验报告周期等实际需要
3、全实验室自动化
通过传输轨道或模块整合把同一品牌(或不同品牌)的临床化学、免疫学、血液学等分析仪连接在一起,形成一个检测平台,与一体化检测平台不同的是,除了各检测仪器的整合以外全实验室自动化系统还包括样本信息接收条形码扫描、样本离心试管开盖、样本分杯和分配、检测后样本保存等模块。
4、小型化
5、高通量化
五、临床检验常用仪器的使用与管理
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医学检验专业的学生在使用仪器以前必须先掌握各仪器的相关知识,包括结构和各主要部件的功能、仪器的技术原理和工作原理、根据仪器制造商发布的操作指南,编写简易并便于执行的操作规程,熟悉操作步骤。
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对于新添置的仪器,操作人员必须经过严格的培训,考核合格后经实验室授权才能上机操作。
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当仪器发生故障时,应按照实验室管理体系的要求对故障进行排除或及时向维修人员报修,维修后进行性能验证。
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仪器的维护应由专人负责,并形成制度化包括:
① 每日维护;
② 每周维护;
③ 每月维护;
④ 每季度维护;
⑤ 年度维护。
- 临床检验实验室对仪器的管理有明确的、切实可行的规章制度包括:
① 技术资料;
② 建立档案;
③ 使用记录;
④ 性能校准;
⑤ 仪器报废等。
❤、检验仪器的性能指标
1、误差
误差:测得值与标称值的差
1. 误差的表示方法
绝对误差=测得值-真值
相对误差=[(测得值-真值) /真值] X 100%
2.误差的分类
系统误差、随机误差、过失误差
(1)系统误差(systematic errorr)
在重复测定条件下,对同一
被测量进行无限多次测量
所得结果的平均值与被测量的真值之差。
1)系统误差的特点:
① 具有单向性、可测性、重复性;
② 通过增加平行测定次数不能消除;
③ 可以预测并可通过调节和校准
来修正。
2)系统误差产生的原因:
① 仪器误差
② 理论误差(方法误差)
③ 操作误差
④ 试剂误差
(2)随机误差( random error)
也称偶然误差
1)随机误差的特点:
① 大小、正负都不固定;
② 可以通过增加测定次数予以减小,但不能通过校正(或校准)来减小或消除;
③ 随机误差比系统误差更具偶然性;
④ 大多数随机误差服从正态分布
;
⑤ 随机误差反映了仪器检测的精密度,随机误差越小,检测结果的精密度越高。
2)随机误差产生的原因:
电压变化、温度变化、湿度变化、甚至灰尘等都会引起测定结果波动。
(3)过失误差
是指在一定的测量条件下,由于分析者操作时粗心大意或违反操作规程,所造成的测量值明显偏离实际值的一种误差。
该误差无规律可寻,也称为坏值,应予剔除。
消除过失误差的最好办法是提高测量人员对实验的认识水平和责任心,要细心操作,认真读、记实验数据,实验完后,要认真检查数据,发现问题,及时纠正。
2、精度与准确度
(1)精度
曾称精确度,是仪器检测可靠程度或检测结果可靠程度的一种评价。
仪器的精度越高,测量结果的不确定度就愈小,即准确度越高。
不确定度=总误差=仪器的随机误差+仪器系统误差准确度是所测值与真值的差值
(2)正确度(真实度)
指仪器对同一被测物进行多次测试结果的平均值与被测物“真值”相接近的程度。
正确度的验证方法:
① 有证的标准物质或合适的参考物质进行验证。
②采用中国合格评定国家认可委员会(CNAS)认可的室间质评结果。
③ 采用公认的、性能已确定的检验方法进行比对试验来验证准确性。
④ 利用回收试验来进行验证(该法需要标准物质)或利用卫生部室间质评结果经统计计算获得
。
3、精密度
精密度(precision) 是在完全相同条件下(平行测定,即批内差)连续进行多次检测时,所得检测结果间彼此接近的程度。
精密度是对仪器随机误差大小的评价,常以标准差(SD)或变异系数(CV)来表示。
精密度和正确度的关系:两者是检验分析仪器两个不同的精度指标。
前者则表示仪器实际检测曲线对其平均值的分散程度,即工作的精细程度或说可靠程度;
后者表示仪器的实际检测曲线偏离理想检测曲线的程度。
4、重复性
(1)重复性(repeatability)
重复性是指在同一检测方法和检测条件下,在一个不太长的时间间隔内,多次检测同一样本的同一参数,所得到的数据的分散程度。
(2)重复性测定的条件
相同的测量环境;
相同的测量仪器及在相同的条件下使用;
相同的位置;
在短时间内的重复测定但“非评行测定”( 属批间差)
(3)重复性与精密度的关系
精密度主要考察检验仪器的稳定性
,重复性主要是考察方法的稳定性
。
后者包含从样品处理到仪器检测的全过程
5、分辨率
分辨率(resolving_ power) 是仪器设备能识别或探测的输入量(或能产生、能响应的输出量)的最小值。
例如光学系统的分辨率就是光学系统可以分清的两物点间的最小间距。
分辨率是检验仪器设备的一个重要技术指标,它与精度紧密相关,要提高检验仪器检测的精密度,必须相应地提高其分辨率。
6、噪音
噪音(noise)也称噪声,是分析仪器在没有加入被检验物品(即输入为零)时,仪器输出信号的波动或变化范围。
(1)引起噪音的原因
① 外界干扰因素
② 仪器内部的因素
(2)噪音的表现形式
①"抖动"即仪器指针以零点为中心作无规则的运动;
②"起伏"即指针沿某一中心作大的往返波动
;
③"漂移"为当输入信号不变时,输出信号发生改变,此时指针沿单方向
慢慢移动。
7、灵敏度与最小检测量
(1)灵敏度(sensitivity)
是指检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比
,反映检验仪器能够检测的最小检测量。
(2)最小检测量( minimum detectable quantity)
是指检验分析仪器能确切
反映的最小物质含量。
检验仪器的灵敏度越高,在同样的噪音水平时其最小检测量就越小。
8、线性范围
线性范围(inear range)是指输入与输出成正比例的范围
。
线性范围越宽,则其量程越大,并且能保证一定的测量精度。
线性范围验证时应选择高浓度新鲜标本进行检测。
9、测量范围与示值范围
(1)测量范围(measuring range)
是指在允许误差范围内仪器所能测出的被检测值的范围,即仪器能直接测定样本中的待测物质而不需进行稀释或浓缩或其他的预处理时的范围。
(2)示值范围(range of indicating value)
是指由仪器所显示或指示的最小值到最大值的范围,也称可报告范围。示值范围亦称仪器的量程,量程大则仪器检测性能好。
10、响应时间
就是响应时间呗